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Dna forense
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1868 – Friedrich
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núcleo de células que
chamou de Nucleína.
Trabalhou com
Glóbulos Brancos
isolados do pus de
feridas contidas em
curativos de hospital.
Histórico - A Descoberta do
DNA
1909 – Theodor Lavene: O DNA
como uma composição de 4
Nucleotídeos. A T G C
Caracterizou quimicamente os
diferentes tipos de Ácidos
Nucléicos.

Mostrou que o DNA era formado
por unidades monoméricas
chamada de nucleotídeo em um
esqueleto baseado em fosfato e
açucar.
Histórico - A Descoberta do
DNA

1928 – Frederick Griffith e o
ensaio com bactérias
patogênicas.
Cepas R (Rough) e S
(Smooth) de Streptococcus
pneumoniae
Agente transformante
Histórico - A Descoberta do
DNA
1943 – Avery, McCarty e McCleod. O
Agente transformador é o DNA.
Histórico - A Descoberta do
DNA
1950 – Erwin Chargaff e a
proporção de Bases
Nitrogenadas. A=T; C=G
Após inúmeros estudos da
composição do DNA em
diversos tecidos e varias
espécies, concluiu que a
ocorrência das quatro bases no
DNA obedece às relações A = T
e C = G. Esta regra é
conhecida como “Regra de
Chargaff”

Org.

Tecido

Guanina

Citosina

Timina

26,0

E. Coli

Adenina

23,9

24,9

25,2

Rato

Osso

28,6

28,4

21,4

21,5

Homem

Figado

30,3

30,3

19,5

19,9

Homem

Semen

30,7

31,2

19,3

18,8
Histórico - A Descoberta do
DNA
1951 – Rosalim Franklin e a
Difração de raios X.
Histórico - A Descoberta do
DNA
1951 – Rosalim Franklin e a
Difração de raios X.
Padrão de difração em formato de
X é típico de estruturas heicoidais.
O fotografia revelou ainda que
havia um padrão de repetição na
estrutura e em séries regulares.
Que o esqueleto Fosfato-açucar
estaria voltada para fora e as bases
voltadas para o interior da
molécula.
Histórico - A Descoberta do
DNA
1953 – Watson e Crick com uso de
modelos e dedução lógica teorizam
a Estrutura do DNA.
1962 – Watson, Crick e Wilkins são
premiados com o prêmio Nóbel
pela descoberta da estrutura do
DNA e sua Importância para a
transferência da informação entre
os seres vivos.
Dna forense
GANHADORES DO NOBEL EM 1962

Francis Crick
(1916 –2004)

James Watson
(1928 )

Maurice Wlkins
(1916-2004)

Rosalin Franklin
(1920-1958)

MLA style: "The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1962". Nobelprize.org.
Nobel Media AB 2013. Web. 7 Nov 2013. <http://www.nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/1962/>
ESTRUTURA E FUNÇÃO DO DNA
A estrutura do DNA
Dupla hélice
Parte externa formada por um
esqueleto de Fosfato-Açucar
alternados.
Parte interna contendo as bases
nitrogenadas.
3 Bilhões de Pares de bases.
Dna forense
Dna forense
DUPLICAÇÃO DO DNA
•

A estrutura do DNA bem como
o pareamento complementar
de Bases revelaram o
segredo da hereditariedade.

•

Acontece que o duplo
filamento de DNA, durante a
divisão celular se separa, e
cada uma funciona como um
molde para fabricaçao de
duas novas moléculas de
DNA.
Cromossomos
Estrutura condensada do DNA
encontrada no núcleo da célula.
Cromossomos Autossômicos 22
pares
Cromossomos Sexuais 1 par
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Cromossomos

O Conjunto de Cromossomos é
resultado da fusão de dois gametas
(óvulo com espermatozóide).
GENE 1
GENE 2
LOCUS
GENE 1
GENE 2
GENE 3
GENE 4

GENE 1
GENE 2
GENE 3
GENE 4
GENE 1
GENE 2
GENE 3
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DNA FINGERPRINTING E OS POLIMORFISMOS
Dna forense
DNA fingerprinting e os
polimorfismos
•

RFLP - Restriction Fragment Length
Polymorphism

•

Se baseia nas diferenças de sítio de
clivagem do DNA por enzimas de
restrição.

•

Foi a primeira técnica utilizada para
análise de DNA.

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Utilizada no mapeamento do genoma
humano e em testes de paternidade.

Alec Jeffrey
DNA fingerprinting e os
polimorfismos
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humano e em testes de paternidade.

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Dna forense
PROJETO GENOMA HUMANO
1990 - Cria-se o consórcio público do
projeto genoma humano, formado por
Instituições científicas de 20 países.
Conhecer a sequência de pares de
bases ao longo da cadeia de DNA.
Permitiu avanços na área da medicina
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ENGENHERIA GENÉTICA
TRANSGENIA
Dna forense
POLIMORFISMOS
•

Polimorfismos de Sequência- Substituição, Deleção, Adição de Bases

•

SNPs – Single Nucleotide Polymorphism

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• ATCT G CCAT – Alelo 2
•

Polimorfismos de tamanho

•

STRs – Short Tandem Repeats

ACCT ACCT ACCT – 3 repetições
ACCT ACCT ACCT ACCT – 4 repetições
DNA MITOCONDRIAL
As Mitocôndrias
São organelas encontradas no
citoplasma da célula.
Atuam fornecedo energia para as
reações químicas produzindo ATP.

Seu número varia entre 500 até
10000 unidades por célula.
Apresentam DNA em forma circular.
Capacidade duplicativa.
Apresentam genes similares aos
encontrados em bactérias.
DNA MITOCONDRIAL
Herança Matrilinear
Durante a fecundação apenas
o núcleo do espermatozóide
entra no óvulo.
Logo, todos os indivíduos de
uma mesma linhagem materna
apresentam o mesmo DNAmt.
Valiosa ferramenta para
identificação de restos mortais.
Não é um exame
individualizador.
Dna forense
Dna forense
PRIMEIRO CASO CRIMINAL AO USAR O EXAME
DE DNA
•

Dois casos de estupro seguido de
homicídio: um Dawn Ashworth e Lynda
Mann, ambas de 15 anos de idade.

•

Um principal suspeito foi interrogado mas
liberado por falta de provas. Seu nome
era Colin Pitchfork.

•

Um homem foi preso e confessou um dos
assassinatos.

•

Resolveram realizar o teste de DNA que
acabou inocentando o rapaz preso.

•

Decidiram coletar amostras de toda a
população masculina. Cerca de 4500
pessoas foram submetidas a coleta de
sangue.
PRIMEIRO CASO CRIMINAL AO USAR O EXAME
DE DNA
•

Pithfork trocou sua amostra de sangue o
que o deixou livre de ser pego.

•

Entretanto uma denuncia anônima dizia ter
ouvido em um PUB que Pitchfork teria
trocado a amostra.

•

Foi o suficiente para ser preso e o teste de
DNA foi refeito, dando resultado positivo.
POPULARIZAÇÃO DO EXAME DE DNA
•

As Séries televisivas
POPULARIZAÇÃO DO EXAME DE DNA
• Casos de repercussão
•

O.J. SIMPSON

•

Acusado de ter assassinado sua ex
mulher Nicole Brown e seu amigo
Ronald Goldman em 1994.

•

Mais de 20 milhões de pessoas
assistiram o julgamento pela TV.

•

45 amostras de sangue no total
ligavam O.J. à cena do crime.
POPULARIZAÇÃO DO EXAME DE DNA
POPULARIZAÇÃO DO EXAME
DE DNA – CASO O.J. SIMPSON

Luvas encontradas na casa de O. J.
Simpson continha perfil genético de
Nicole.
Manchas de sangue encontradas no
carro de Simpson continha perfil
genético de Nicole.

Fibras e cabelos
POPULARIZAÇÃO DO EXAME
DE DNA – CASO O.J.
SIMPSON
Porque houve a absolvissão mesmo com a
evidência do DNA forense incriminando O. J.
Simpson?

O Exame era novidade nos tribunais.
Falta de prática na coleta e manuseio do
vestígio biológico.
Falta de padronização dos exames.
Resultados estatísticos muitas vezes difíceis
de entender.

Simpson após receber o veridicto.
Perícia Criminal em Local do Crime – COLETA
E PRESERVAÇÂO DE AMOSTRAS

A resolulção de crimes depende da
associação dos vestígios materiais
encontrados no local de crime.
Materiais biológicos que podem
conter DNA
Fluídos corporais –
• Suor, sangue,
• saliva, sêmen,
• urina, secreção vaginal.

Restos mortais
• Dentes e ossos.

Fios de
cabelos, pelos, unhas.
Vestígios potenciais para busca de DNA
Objetos pessoais
• óculos, boné, sapato, sandálias, escova, etc.
..

Objetos descartados
• Guardanapo, Garrafas plásticas, Palito de
dente, cigarro, etc...

Armas manuseadas
• Barra de ferro, porrete, faca, espeto de
churrasco, etc...
Métodos gerais de busca –
Como encontrar?
Vestígios latentes
Necessitam de técnicas
específicas para torná-las visíveis.
Testes preliminares

Indicam ou classificam a natureza
de um vestígio biológico.
Testes confirmatórios
Confirmam a natureza de um
vestigio.
Dna forense
MÉTODOS DE BUSCA –
Luz Forense
Se baseia no fenômeno da
fluorescência de certas substâncias
ao incindir uma luz sobre elas.
Alguns materiais refletem um
comprimento de onda enquanto
absorvem outros.
Fluídos corporais

Impressões digitais

Pêlos e fibras
MÉTODOS DE DETECÇÃO –
LUZ FORENSE

Comportamento espectral da
absorção do sangue seco.

•

Espectro de fotoluminescência de semen seco.
Dna forense
Dna forense
MÉTODOS DE BUSCA –
Testes preliminares para
sangue
Vestígio comum em crimes contra a vida
e relativamente frequente em crimes
contra o patrimônio.

A presença de sangue pode ser de
muito valor em determinadas ocasiões.

A análise do padrão de dispersão de
sangue pode fornecer indícios sobre a
dinâmica do ocorrido.
Tendência em ocultar tal vestígio.
Teste de
Fluorescência/Luminescência
Teste de
Flourescência/Luminescência
Um dos testes mais antigos. Criada em 1928.
Na presença de H 2O2 sofre uma reação de oxidação tendo o Fe
presente na hemoglobina como catalisador.
A sensibilidade chega a PPB (Parte Por Bilhão).
Capaz de detectar sangue após 6 anos.
Teste de
Flourescência/Luminescência
BLUE STAR FORENSIC
Apresenta maior intensidade de
brilho
Maior tempo de duração.
Pode-se obter a visualização em
condições de penunbra.
Não degrada o DNA.
Testes de coloração
Teste da Benzidina (Adler Ascarelli)
Reação de oxidação da Benzidina em meio ácido,
que resulta na formação de um produto
intermediário de cor azul.
Testes de coloração
Teste da Benzidina (Adler Ascarelli)
Passo 1: Adiciona uma solução de benzidina
diluída com ácido acetico sobre a mancha.
Passo 2: Em seguinda pinga-se uma gota de
Peróxido de Hidrogênio.
Testes de coloração
Teste da Fenolftaleína (Kastle-Meyer)
Oxidação da Fenoftaleína em solução alcalina
com mudança de cor para Rosa.
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Dna forense
Dna forense
Fatores que afetam a análise do
DNA.
•

Coletar de maneira correta afim de minimizar a
degradação do DNA:
• Sangue Líquido: Suabe, Seringa

Degradação
Calor
Umidade
Luz Solar
Substâncias
químicas
Fatores que afetam a análise do
DNA.
•

Coletar de maneira correta afim de minimizar a
degradação do DNA:
• Sangue Líquido: Suabe, Seringa

Degradação
Calor
Umidade
Luz Solar
Substâncias
químicas
Fatores que afetam a análise do
DNA.
•

Coletar de maneira correta afim de minimizar a degradação
do DNA:
•

Degradação
Calor
Umidade
Luz Solar
Substâncias
químicas

Sangue em objetos removíveis: Acondicionamento em
sacos plástico ou de papel.
Fatores que afetam a análise do
DNA.
•

Coletar de maneira correta afim de minimizar a
degradação do DNA:
• Sangue Seco: Suabe ou raspagem.

Degradação
Calor
Umidade
Luz Solar
Substâncias
químicas
Fatores que afetam a análise do
DNA.
•

Degradação
Calor
Umidade
Luz Solar
Substâncias
químicas

Coletar de maneira correta afim de minimizar a
degradação do DNA:
• Sêmen em camisinha: Acondicionamento ou
suabe.
Os marcadores STRs
São extremamente populares em análises de
DNA forense devido a sua análise ser baseada
em PCR e a funcionarem com pouca
quantidade de DNA molde ou mesmo com
amostras degradadas.
Os métodos de análise de microssatélites são
facilmente automatizados, e envolvem
detecção por fluorescência, o que permite que
o analista colete dados destes marcadores
rapidamente.
Os STRs são altamente discriminativos entre
indivíduos não relacionados e mesmo entre
estreitamente aparentados.
Etapas do Exame de
DNA
AMOSTRAGEM
O vestígio é analisado no Contexto do
Local do Crime.

EXTRAÇÃO
As Amostras são submetidas a processos químico e
físico que permitem o isolamento do DNA dos
demais componentes.

QUANTIFICAÇÃO
Uma Reação de PCR em tempo real permite
estimar a quantidade de DNA presente.
Etapas do Exame de
DNA
AMPLIFICAÇÃO
Regiões específicas do DNA são
replicadas milhares de vezes.

ELETROFORESE CAPILAR
O produto da PCR, fragmentos de DNA, são
separados por tamanho e visualizados sob forma
de picos (eletroferograma).
Extração do DNA
Servem para separar o DNA de
outros componentes celulares e
outros contaminantes.

Extração Orgânica.

Extração por chelex.

Extração por Papel FTA.
Extração do DNA
Extração Diferencial.
Utilizado em casos de crimes
sexuais em que a amostra contém
células masculinas e femininas em
uma mistura.
Azoospermia.
Uso de camisinha.
Amplificação por PCR
Permite realizar milhões de cópias de
DNA em poucas horas.
Primer – Se ligam ao DNA em locais
específicos.
DNA Polimerase – Adiciona os nt a
cadeia pelo pareamento complementar
Envolve o aquecimento e resfriamento
da amostra.
Amplificação por PCR
Permite realizar milhões de cópias de
DNA em poucas horas.
Primer – Se ligam ao DNA em locais
específicos.
DNA Polimerase – Adiciona os nt a
cadeia pelo pareamento complementar
Envolve o aquecimento e resfriamento
da amostra.
PCR em Tempo real.

Termociclador
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Dna forense

  • 3. Histórico - A Descoberta do DNA Experiência Clássica com ervilhas • Unidade de transferência da hereditariedade ou Gene • Recessividade e Dominância • Heterozigose e Homozigose • Genótipo e Fenótipo • Gregor Mendel – 1864
  • 4. Histórico - A Descoberta do DNA 1868 – Friedrich Mischer Purificou uma nova substância do núcleo de células que chamou de Nucleína. Trabalhou com Glóbulos Brancos isolados do pus de feridas contidas em curativos de hospital.
  • 5. Histórico - A Descoberta do DNA 1909 – Theodor Lavene: O DNA como uma composição de 4 Nucleotídeos. A T G C Caracterizou quimicamente os diferentes tipos de Ácidos Nucléicos. Mostrou que o DNA era formado por unidades monoméricas chamada de nucleotídeo em um esqueleto baseado em fosfato e açucar.
  • 6. Histórico - A Descoberta do DNA 1928 – Frederick Griffith e o ensaio com bactérias patogênicas. Cepas R (Rough) e S (Smooth) de Streptococcus pneumoniae Agente transformante
  • 7. Histórico - A Descoberta do DNA 1943 – Avery, McCarty e McCleod. O Agente transformador é o DNA.
  • 8. Histórico - A Descoberta do DNA 1950 – Erwin Chargaff e a proporção de Bases Nitrogenadas. A=T; C=G Após inúmeros estudos da composição do DNA em diversos tecidos e varias espécies, concluiu que a ocorrência das quatro bases no DNA obedece às relações A = T e C = G. Esta regra é conhecida como “Regra de Chargaff” Org. Tecido Guanina Citosina Timina 26,0 E. Coli Adenina 23,9 24,9 25,2 Rato Osso 28,6 28,4 21,4 21,5 Homem Figado 30,3 30,3 19,5 19,9 Homem Semen 30,7 31,2 19,3 18,8
  • 9. Histórico - A Descoberta do DNA 1951 – Rosalim Franklin e a Difração de raios X.
  • 10. Histórico - A Descoberta do DNA 1951 – Rosalim Franklin e a Difração de raios X. Padrão de difração em formato de X é típico de estruturas heicoidais. O fotografia revelou ainda que havia um padrão de repetição na estrutura e em séries regulares. Que o esqueleto Fosfato-açucar estaria voltada para fora e as bases voltadas para o interior da molécula.
  • 11. Histórico - A Descoberta do DNA 1953 – Watson e Crick com uso de modelos e dedução lógica teorizam a Estrutura do DNA. 1962 – Watson, Crick e Wilkins são premiados com o prêmio Nóbel pela descoberta da estrutura do DNA e sua Importância para a transferência da informação entre os seres vivos.
  • 13. GANHADORES DO NOBEL EM 1962 Francis Crick (1916 –2004) James Watson (1928 ) Maurice Wlkins (1916-2004) Rosalin Franklin (1920-1958) MLA style: "The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1962". Nobelprize.org. Nobel Media AB 2013. Web. 7 Nov 2013. <http://www.nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/1962/>
  • 15. A estrutura do DNA Dupla hélice Parte externa formada por um esqueleto de Fosfato-Açucar alternados. Parte interna contendo as bases nitrogenadas. 3 Bilhões de Pares de bases.
  • 18. DUPLICAÇÃO DO DNA • A estrutura do DNA bem como o pareamento complementar de Bases revelaram o segredo da hereditariedade. • Acontece que o duplo filamento de DNA, durante a divisão celular se separa, e cada uma funciona como um molde para fabricaçao de duas novas moléculas de DNA.
  • 19. Cromossomos Estrutura condensada do DNA encontrada no núcleo da célula. Cromossomos Autossômicos 22 pares Cromossomos Sexuais 1 par XX Mulher XY Homem
  • 20. Cromossomos O Conjunto de Cromossomos é resultado da fusão de dois gametas (óvulo com espermatozóide).
  • 22. GENE 1 GENE 2 GENE 3 GENE 4 GENE 1 GENE 2 GENE 3 GENE 4 GENE 1 GENE 2 GENE 3 GENE 4 GENE 1 GENE 2 GENE 3 GENE 4
  • 23. DNA FINGERPRINTING E OS POLIMORFISMOS
  • 25. DNA fingerprinting e os polimorfismos • RFLP - Restriction Fragment Length Polymorphism • Se baseia nas diferenças de sítio de clivagem do DNA por enzimas de restrição. • Foi a primeira técnica utilizada para análise de DNA. • Utilizada no mapeamento do genoma humano e em testes de paternidade. Alec Jeffrey
  • 26. DNA fingerprinting e os polimorfismos • RFLP - Restriction Fragment Length Polymorphism • Se baseia nas diferenças de sítio de clivagem do DNA por enzimas de restrição. • Foi a primeira técnica utilizada para análise de DNA. • Utilizada no mapeamento do genoma humano e em testes de paternidade. Alec Jeffrey
  • 28. PROJETO GENOMA HUMANO 1990 - Cria-se o consórcio público do projeto genoma humano, formado por Instituições científicas de 20 países. Conhecer a sequência de pares de bases ao longo da cadeia de DNA. Permitiu avanços na área da medicina CLONAGEM ENGENHERIA GENÉTICA TRANSGENIA
  • 30. POLIMORFISMOS • Polimorfismos de Sequência- Substituição, Deleção, Adição de Bases • SNPs – Single Nucleotide Polymorphism • ATCT C CCAT – Alelo 1 • ATCT G CCAT – Alelo 2 • Polimorfismos de tamanho • STRs – Short Tandem Repeats ACCT ACCT ACCT – 3 repetições ACCT ACCT ACCT ACCT – 4 repetições
  • 31. DNA MITOCONDRIAL As Mitocôndrias São organelas encontradas no citoplasma da célula. Atuam fornecedo energia para as reações químicas produzindo ATP. Seu número varia entre 500 até 10000 unidades por célula. Apresentam DNA em forma circular. Capacidade duplicativa. Apresentam genes similares aos encontrados em bactérias.
  • 32. DNA MITOCONDRIAL Herança Matrilinear Durante a fecundação apenas o núcleo do espermatozóide entra no óvulo. Logo, todos os indivíduos de uma mesma linhagem materna apresentam o mesmo DNAmt. Valiosa ferramenta para identificação de restos mortais. Não é um exame individualizador.
  • 35. PRIMEIRO CASO CRIMINAL AO USAR O EXAME DE DNA • Dois casos de estupro seguido de homicídio: um Dawn Ashworth e Lynda Mann, ambas de 15 anos de idade. • Um principal suspeito foi interrogado mas liberado por falta de provas. Seu nome era Colin Pitchfork. • Um homem foi preso e confessou um dos assassinatos. • Resolveram realizar o teste de DNA que acabou inocentando o rapaz preso. • Decidiram coletar amostras de toda a população masculina. Cerca de 4500 pessoas foram submetidas a coleta de sangue.
  • 36. PRIMEIRO CASO CRIMINAL AO USAR O EXAME DE DNA • Pithfork trocou sua amostra de sangue o que o deixou livre de ser pego. • Entretanto uma denuncia anônima dizia ter ouvido em um PUB que Pitchfork teria trocado a amostra. • Foi o suficiente para ser preso e o teste de DNA foi refeito, dando resultado positivo.
  • 37. POPULARIZAÇÃO DO EXAME DE DNA • As Séries televisivas
  • 38. POPULARIZAÇÃO DO EXAME DE DNA • Casos de repercussão • O.J. SIMPSON • Acusado de ter assassinado sua ex mulher Nicole Brown e seu amigo Ronald Goldman em 1994. • Mais de 20 milhões de pessoas assistiram o julgamento pela TV. • 45 amostras de sangue no total ligavam O.J. à cena do crime.
  • 40. POPULARIZAÇÃO DO EXAME DE DNA – CASO O.J. SIMPSON Luvas encontradas na casa de O. J. Simpson continha perfil genético de Nicole. Manchas de sangue encontradas no carro de Simpson continha perfil genético de Nicole. Fibras e cabelos
  • 41. POPULARIZAÇÃO DO EXAME DE DNA – CASO O.J. SIMPSON Porque houve a absolvissão mesmo com a evidência do DNA forense incriminando O. J. Simpson? O Exame era novidade nos tribunais. Falta de prática na coleta e manuseio do vestígio biológico. Falta de padronização dos exames. Resultados estatísticos muitas vezes difíceis de entender. Simpson após receber o veridicto.
  • 42. Perícia Criminal em Local do Crime – COLETA E PRESERVAÇÂO DE AMOSTRAS A resolulção de crimes depende da associação dos vestígios materiais encontrados no local de crime.
  • 43. Materiais biológicos que podem conter DNA Fluídos corporais – • Suor, sangue, • saliva, sêmen, • urina, secreção vaginal. Restos mortais • Dentes e ossos. Fios de cabelos, pelos, unhas.
  • 44. Vestígios potenciais para busca de DNA Objetos pessoais • óculos, boné, sapato, sandálias, escova, etc. .. Objetos descartados • Guardanapo, Garrafas plásticas, Palito de dente, cigarro, etc... Armas manuseadas • Barra de ferro, porrete, faca, espeto de churrasco, etc...
  • 45. Métodos gerais de busca – Como encontrar? Vestígios latentes Necessitam de técnicas específicas para torná-las visíveis. Testes preliminares Indicam ou classificam a natureza de um vestígio biológico. Testes confirmatórios Confirmam a natureza de um vestigio.
  • 47. MÉTODOS DE BUSCA – Luz Forense Se baseia no fenômeno da fluorescência de certas substâncias ao incindir uma luz sobre elas. Alguns materiais refletem um comprimento de onda enquanto absorvem outros.
  • 49. MÉTODOS DE DETECÇÃO – LUZ FORENSE Comportamento espectral da absorção do sangue seco. • Espectro de fotoluminescência de semen seco.
  • 52. MÉTODOS DE BUSCA – Testes preliminares para sangue Vestígio comum em crimes contra a vida e relativamente frequente em crimes contra o patrimônio. A presença de sangue pode ser de muito valor em determinadas ocasiões. A análise do padrão de dispersão de sangue pode fornecer indícios sobre a dinâmica do ocorrido. Tendência em ocultar tal vestígio.
  • 54. Teste de Flourescência/Luminescência Um dos testes mais antigos. Criada em 1928. Na presença de H 2O2 sofre uma reação de oxidação tendo o Fe presente na hemoglobina como catalisador. A sensibilidade chega a PPB (Parte Por Bilhão). Capaz de detectar sangue após 6 anos.
  • 55. Teste de Flourescência/Luminescência BLUE STAR FORENSIC Apresenta maior intensidade de brilho Maior tempo de duração. Pode-se obter a visualização em condições de penunbra. Não degrada o DNA.
  • 56. Testes de coloração Teste da Benzidina (Adler Ascarelli) Reação de oxidação da Benzidina em meio ácido, que resulta na formação de um produto intermediário de cor azul.
  • 57. Testes de coloração Teste da Benzidina (Adler Ascarelli) Passo 1: Adiciona uma solução de benzidina diluída com ácido acetico sobre a mancha. Passo 2: Em seguinda pinga-se uma gota de Peróxido de Hidrogênio.
  • 58. Testes de coloração Teste da Fenolftaleína (Kastle-Meyer) Oxidação da Fenoftaleína em solução alcalina com mudança de cor para Rosa.
  • 62. Fatores que afetam a análise do DNA. • Coletar de maneira correta afim de minimizar a degradação do DNA: • Sangue Líquido: Suabe, Seringa Degradação Calor Umidade Luz Solar Substâncias químicas
  • 63. Fatores que afetam a análise do DNA. • Coletar de maneira correta afim de minimizar a degradação do DNA: • Sangue Líquido: Suabe, Seringa Degradação Calor Umidade Luz Solar Substâncias químicas
  • 64. Fatores que afetam a análise do DNA. • Coletar de maneira correta afim de minimizar a degradação do DNA: • Degradação Calor Umidade Luz Solar Substâncias químicas Sangue em objetos removíveis: Acondicionamento em sacos plástico ou de papel.
  • 65. Fatores que afetam a análise do DNA. • Coletar de maneira correta afim de minimizar a degradação do DNA: • Sangue Seco: Suabe ou raspagem. Degradação Calor Umidade Luz Solar Substâncias químicas
  • 66. Fatores que afetam a análise do DNA. • Degradação Calor Umidade Luz Solar Substâncias químicas Coletar de maneira correta afim de minimizar a degradação do DNA: • Sêmen em camisinha: Acondicionamento ou suabe.
  • 67. Os marcadores STRs São extremamente populares em análises de DNA forense devido a sua análise ser baseada em PCR e a funcionarem com pouca quantidade de DNA molde ou mesmo com amostras degradadas. Os métodos de análise de microssatélites são facilmente automatizados, e envolvem detecção por fluorescência, o que permite que o analista colete dados destes marcadores rapidamente. Os STRs são altamente discriminativos entre indivíduos não relacionados e mesmo entre estreitamente aparentados.
  • 68. Etapas do Exame de DNA AMOSTRAGEM O vestígio é analisado no Contexto do Local do Crime. EXTRAÇÃO As Amostras são submetidas a processos químico e físico que permitem o isolamento do DNA dos demais componentes. QUANTIFICAÇÃO Uma Reação de PCR em tempo real permite estimar a quantidade de DNA presente.
  • 69. Etapas do Exame de DNA AMPLIFICAÇÃO Regiões específicas do DNA são replicadas milhares de vezes. ELETROFORESE CAPILAR O produto da PCR, fragmentos de DNA, são separados por tamanho e visualizados sob forma de picos (eletroferograma).
  • 70. Extração do DNA Servem para separar o DNA de outros componentes celulares e outros contaminantes. Extração Orgânica. Extração por chelex. Extração por Papel FTA.
  • 71. Extração do DNA Extração Diferencial. Utilizado em casos de crimes sexuais em que a amostra contém células masculinas e femininas em uma mistura. Azoospermia. Uso de camisinha.
  • 72. Amplificação por PCR Permite realizar milhões de cópias de DNA em poucas horas. Primer – Se ligam ao DNA em locais específicos. DNA Polimerase – Adiciona os nt a cadeia pelo pareamento complementar Envolve o aquecimento e resfriamento da amostra.
  • 73. Amplificação por PCR Permite realizar milhões de cópias de DNA em poucas horas. Primer – Se ligam ao DNA em locais específicos. DNA Polimerase – Adiciona os nt a cadeia pelo pareamento complementar Envolve o aquecimento e resfriamento da amostra.
  • 74. PCR em Tempo real. Termociclador